Witam!

Mam mały problem. Po zmierzeniu absorbancji sulfhemoglobiny okazało się, że nie mam odpowiedniego maksimum widma ;/ wartości przy 620 nm spadają na łeb na szyje ;/

Ktoś sie może orientuje co jest tego przyczyną? Pomiar robiony na starym spekolu. Hemolizat stosunkowo dobry bo przy oksy wszystko wychodzi jak wyjść powinno.

pozdrawaim

przyznaje sie od razu nie wiem co to jest ta sulfcostam
ale to co piszesz wskazuje iz jest to prawidlowe i normalne
Choć przyznam że za bardzo nie łapie - moze jak bys cos wiecej powiedzial o tym twoim oznaczeniu to byla by podpowiedz.
Jesli dobrze sie domyslam co tam robiles w tym oznaczeniu to opis przyczyn znajdziesz w pierwszym lepszym podręczniku ChA czy internecie np http://www.mlyniec.gda.pl/~chemia/ogolna/uv.htm
Od strony praktycznej moge ci wstepnei podpowiedziec rzeczywiste przyczyny jakie spotkalem w ciagu kilku lat pracy :
- podstawowa najwazniejsza : niechlujstwo i bród, nie zrobiono współmierności anczyń (atest sobie mozesz na uczelni uzywac a nie w realych warunkach) , nie przestrzeganie procedur przygotowania próbki i obsługi spekola => przestrzegac
- poziom zycia w spekolu osiagnol wartosc krytyczna - wyczyscic !
- laborant wyczyscil sitke dyfrakcyjna => opieprzyc laboranta, nie smaic sie chcial dobrze, do serwisu
- początek śmierci lampy => wymienic
- niezwrocenie uwagi na zgodnosc kuwet => popatrzec co na tych kuwetach pisze i nei tylko
- paluch kwapy itp itd => kosmetyki dobre na imprezke ale nei tu, chwytac za matowe a nei przezroczyste . usunac zanieczyszczenai z powierzchni
- zakłócenia w sieci energetycznej => stabilizator
- próbka nei wino starsza nei bedzie lepsza
i to tyle co mi sie przypomnialo
moze na cos sie przyda
jak poasz troche wiecej szczegolow o tym oznaczeniu to moze cos wiecej sie poda

a mi sie wydaje najprawdopodobniejsze to że pewnie to była jakas stara probka, a nie przygotowana na świeżo no i zaszly kochane odchylenia od prawa Beera.

ps. opisz wykonanie pomiaru dokladniej.

pozdrawiam.

tez tak myslaelm bo " próbka nei wino starsza nei bedzie lepsza
" ale laborki raczej nei trwaja az tak bardzo dlugo chociaz moze specyfika oznaczenai wynaga aby dokonac pomiaru w okreslonym czasie
O wlasnei jeszcze jedno mi sie przypomnialo .
W neiktorych przypadkach przyczyna moze byc ZBYT WCZESNE ! wykonanei pomiaru.

zbyt wczesnie ? co masz na mysli?

nie znam specyfikij tego oznczenia i nie moge stwierdzic ze W TYM oznaczeniu sulcostam tak jest.
A mowie to na podstawie tego ze jedno z oznaczen wykonywane na ruchu wymagalo odczekania ilus tam minut aby wytworzony kolorowy kompleks osiagnal stabilną absorbancje wynikało to z kinetyki tworzenia tego kompleksu
szczegoly moge odkopac bo gdzies tam mam materialy (chyba) - notowanie to zawodowe zboczenei . Z tym ze okres w ktorym mozna bylo dokonywac pomiarumiał tez ograniczenie czasowe chyba po godzinie roztwor nadawal sie tylko do smieci

CU dokladnie czasem potrzeba czasu do zawiazania kolorowych kompleksow przyklady:
oznaczanie azotu amonowego - 15 minut
oznaczanie Fe3+ - 5 minut
oznaczanie Sn2+ - 10 minut
jakw szytkie oznaczenia sciekow i wody z firmy aqualab [ http://www.aqualab.com.pl/wis.htm ]
etc.
mowie tutaj o gotowcach - to znaczy dodaje sie po kilka kropli odczynnika "1" pozniej "2" etc. do 10 ml. badanej probki i pozniej bada sie ekstynkcje

a jesli chodzi o sam pomiar, z wykresu podanego przez CU, wynika ze powyzej 620 nm powinno zaczac opadac, ale jesli jest stara lampa, bardz tez nieaktualny wykres krzywej wzorcowej (nalezy wykonywac minimum raz na 6 miesiecy) - wynikajacy z przepracowania lampy - nalezalo by sobie zrobic kilka probek wzorocwych i narysowac wykres ponownie, a nastepnie wykonac probke raz jeszcze
ale wtedy przedewszytkim zachowac 100% uwagi i czystosci

a moze masz po prostu brudne kuwety ? - np. ktos ich nie domyl i teraz sa na nich jakies pozostalosci innych probek ktore sie nie da latwo i konwencjonalnie zmyc ? - proponowal bym zrobic krzywa wzorcowa i dopiero wtedy zabrac sie za pomiar

i jeszcze jeden 'drobiazg' : uzywac tych samych sparowanych kuwet do kalibracji i do pomairu jak to mowia nie tylko grubosc gra role to ze jest taka sama moze czasami zmylic szczegolnei jak sie ma to co sie ma a nei co sie chce

Dzięki za odpowiedzi

co do szczegółów pomiaru:
hemolizat + Na2S odstał jakieś 15 minut a potem została zmierzona absorbancja przy falach o długościach od 350-700nm co 10 nm.

pewnie jest to wina substratu. a poza tym ta krew pewnie już długo w lodówach postała:P
no i sprzęt nie jest ani nowy ani raczej zadbany.

no i chyba wyszlo na moje niechcacy o ile dobrze zrozumialem co piszesz :

Patrzac an wykres widac iz prawidloww postac widma jest zblizona do tego co piszesz po okolo 620 nm absorbancja spada na leb na szyje. Z twojego opisu wynika iz maximum jest polozone w stosownym miejscu

dlaczego uwazasz ze jest zle ?

heh, wyrazniłem się trochę nie jasno, wartości przed i po 620 spadają mocno. przy 620 nm nie ma maksimum

pozdrawaim

Jesli wartosci absorbancji przed i po 620 spadaja mcno ti by wskazywalo na maksimum absorbancji przy dlugosci fali 620 nm

jak widac trafiles na oporny egzlemolarz ktory dalej swoje gada
Po mojemu to mksimum i jesli mowisz o ostrych spadkach to maksimum w miare wyrazne spelniajace warunki aby kandydowac na mister maksimum dla damnego oznaczenia

hehe znowu się nie zrozumieliśmy ; )

przy 620 nm, nie ma maksimum, wartości spadają ciągle. podam mniej więcej wartości, żeby juz było jasne

590nm - 0,300
600nm - 0,265
610nm - 0,241
620nm - 0,214
630nm - 0,180
i w dół

eeeee on nie przed i po tylko caly czas spada a wlasciwie leci na leb na szyje
Ma to jak widac z wykresem producenta niewiele wspolnego z SulfHB.
Albo aparat ma calkowicie rozlegulowana czesc optyczna i to co nastawiasz neima nic wspolnego z rzeczywista dlugoscia fali albo twoja probka ma tyle wspolnego z hemoglobina co szynka za 7 zl /kg z miesem.

Jesli inne pomiary wychodza ci prawidlowo to zostaje probka. Jesli innym osobom to badanei widma wychodzi to stawialbym na to co mowilismy poprzednio czyli - przyłóż sie do roboty
Na ten drugi wariant wskazywalo by to ze jak pisales inna metoda wyszlo ci dobrze.

Choc prawdopodobne jest takzae iz tak zmieniles warunki oznaczenia ze wszystko jest dobrze od strony sprzetu i metodyki wykonania pomaiu natomaist cos padlo na etappie sporzadzanai. Ewentualnie dostałęś zamiast hemocostam kolorowa farbke